酶制剂检测中纤维素酶怎么样提取

    用产酶菌

 

    酶的提取主要有几个方法：盐析、凝胶住分离、膜分离、透析。。。

 

    对于纤维素的分离查了篇文献，粗粉采用的是盐析，细分用的凝胶柱分离，过程如下：

 

    提取：

 

    1.用硫酸钱沉淀法获粗酶制剂，溶在适量蒸馏水中.

 

    2.经过透析脱盐，Ba2+检测脱盐程度，以不形成白色浑浊为限.

 

    3.停止透析，浓缩

 

    分离：

 

    4.上样，过Sephadex凝胶柱柱，sephadex型号的选择可以通过ladder估计分子量后选择

 

    5.通过活性实验对凝胶柱分离的每一组分做活性实验，确定活性组分，然后对活性组分进一步细分或者直接得到酶。

 

    6.再细分的话，可以选择更合适的葡聚糖凝胶或者用电泳分离。

 

    菌种选育是纤维素酶生产的基础性工作，国内外许多专家进行了大量研究，为了生产高质量的纤维素酶产品，王家林等（1996）在吸收国内外经验的基础上，先后引进了绿色木霉木10、绿色木霉sn-91014、康氏木霉nt-15、黑曲霉xx-15a，在此基础上，采用了紫外线、特定电磁波辐射、线性加速器，亚硝基胍等物理、化学的诱变方法，获得了高产菌株nt15-h、nt15-h1、xt-15h、xt-15h1。其中木霉nt-15h固体培养活力经轻工部食品质量监督检测中心南京站检测表明，滤纸活力为3670u/g,c1-酶活力24460u/g，cx-酶活力1800u/g，已达到国际先进水平。

 

    此菌种在工厂化生产中性能稳定。张苓花等（1998）采用康氏木霉w-925，j-931，经过浓度为2%硫酸二乙酯和紫外线（15w、30cm、2min）复合诱变后，得到了产酶活性高的wu-932菌种，该菌种cmc糖化力达到2975，滤纸糖酶活性为531，比出发菌w-925分别提高了100%和81%。化工部饲料添加剂技术服务中心王成书等（1997）采用该中心的里氏木霉a3先进行紫外线和亚硝基胍复合诱变后，将处理过的孢子接种于纤维双层平板上，30℃培养5-8天，15℃放置7-10天。

 

    挑选透明圈直径和菌落直径比较大的单菌落进行三角瓶固态发酵再筛选，得到了产纤维素酶活力很高的里氏木霉91-3菌株。纤维素酶菌种易退化，退化后其产酶力明显降低，其原因可能有三个方面：

 

    ①经诱变筛选的菌种发生回复突变。

 

    ②自然负突变。

 

    ③菌种长时间低温斜面保藏，会在分生孢子上长出次生菌丝，而次生菌丝所形成的分生孢子生命力弱，这可能是菌种退化的主要原因。为了避免纤维素酶菌种退化，张苓花等（1998）报道，采用砂土管保藏菌种。即将过筛洗净的砂子与土以3：2比例混合分装在试管内，用1kg/cm2压力灭菌30分钟共三次，将欲保存的斜面菌种制备成1000ml孢子悬浮液，每个砂土管注入0.5ml，摇匀，放入盛有无水cacl2真空干燥器内保存。经测定，在所测的121天内，酶的活性基本不变；酶活性下降50%的时间，由常规方法的60天延长至160天，明显地减缓了菌种退化速度。

 

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